低滲透腫脹（HOS 測試）
低滲透壓腫脹進行活力測試
作為染料排除的替代方法，低滲透膨脹測試可用於評估活力。當必須避免精子染色時（例如精子染色），這非常有用。選擇精子進行胞漿內單一精子注射 (ICSI) 時。低滲透壓膨脹試驗假定只有具有完整細胞膜的細胞（活細胞）才能在低滲透壓溶液中膨脹。具有完整膜的精子在低滲透壓介質中 5 分鐘內膨脹，並且所有鞭毛形狀在 30 分鐘內穩定。
• 使用30 分鐘培養進行常規診斷。
• 當要處理精子用於治療用途時，培養 5 分鐘。
試劑製備 1. 診斷用溶脹液：將 0.735 g 二水檸檬酸鈉和 1.351 g D-果糖溶於 100 ml 純化水中。
• 此溶液的 1 ml 等分樣本可以在 –20 °C 下冷凍。
2. 對於用於醫學輔助生殖 (MAR) 的精子，以適當的無菌純淨水 1+1 (1:2) 稀釋要使用的培養基。
實驗步驟
1. 使用前將冷凍溶脹液解凍並混合。
2. 將 1 ml 溶脹溶液或 1 ml 1+1 (1:2) 稀釋培養基放入封閉的微量離心管中，37 °C 加熱 5 分鐘。
3. 充分混合精液。
4. 取出 100 µl 等份精液並加入溶脹溶液中。透過將其吸入和拉出移液器輕輕混合。
5. 在 37 °C 下孵育剛好 5 分鐘或 30 分鐘（見上文），然後將 10 µl 等份轉移到乾淨的玻片上，並蓋上 22 mm × 22 mm 蓋玻片。
6. 重新混合精液樣本，取出複製等分試樣，與溶脹溶液混合，並製備複製載玻片，如上所述。
7. 使用相差光學元件在 ×200 或 ×400 倍放大倍率下檢查每張玻片。
8. 利用實驗室計數器計算未腫脹（死）和腫脹（活）細胞的數量。
9. 每次重複評估 200 個精子，以達到可接受的低採樣誤差。
評分
1. 腫脹的精子透過細胞形狀的變化來識別，如尾部捲曲所示。
2. 透過精子尾部腫脹的跡象來區分活細胞；將所有形式的腫脹尾巴視為活精子。
陽性 = >60% 腫脹
陰性 = < 50% 腫脹
