低渗透肿胀(HOS 测试
低洼水面进行活力测试
染料排除的替代方法,低渗透膨胀测试可用于增强活力。当必须避免卵巢染色时(例如精子染色),这非常有用。选择精子进行胞浆内单一注射(ICSI)时。低渗透压膨胀试验假设只有具有完整细胞膜的细胞(活细胞)才能在低渗透压溶液中膨胀。具有完整膜的动力在低渗透压介质中5分钟内膨胀,并且所有鞭毛形状在30分钟内稳定。
• 使用30分钟培养进行常规诊断。
• 当要处理精蟲用于治疗用途时,培养5分钟。
试剂制备 1. 诊断用溶胀液:将 0.735 g 二水柠檬酸钠和 1.351 g D-果糖溶于 100 ml 充气水中。
• 该溶液的 1 ml 等份样本可以在 –20 °C 下冷冻。
2.对于用于医学辅助生殖(MAR)的动力,以适当的污染物净化水1+1(1:2)引导要使用的培養基。
步骤实验
1.使用前将冷冻溶胀液解冻并混合。
2.将1ml溶胀溶液或1ml 1+1(1:2)放入培养基封闭的微量离心管中,37℃加热5分钟。
3.充分混合精液。
4.取出100 µl等份精液并加入溶胀溶液中。通过将其吸入并拉出移液器轻轻混合。
5. 在 37 °C 下放置 5 分钟或 30 分钟(见下文),然后将 10 µl 等份转移到干净的玻片上,并盖上 22 mm × 22 mm 盖玻片。
6.重新混合精液样本,取出复制等分样品,与溶胀溶液混合,并制备复制载玻片,同上。
7. 使用外围光学元件在×200或×400倍放大倍率下检查每张玻片。
8.利用实验室计数计算未肿(死)和肿(活)细胞的数量。
9. 重复评估 200 个打印机,以达到最低的低采样托盘。
评分
1. 腹腔的膀胱穿过细胞形状的变化来识别,如尾部卷曲所示。
2. 精子尾部肿脹的依次来区分活细胞;将所有形式的肿囊尾部视为活精子。
阳性 = >60% 肿胀
阴性 = < 50% 肿胀